畢赤酵母蛋白表達(dá)載體

概述

我們的畢赤酵母重組蛋白表達(dá)載體系統(tǒng)有著非常強(qiáng)大高效的重組蛋白表達(dá)能力。畢赤酵母作為一種甲基營養(yǎng)型酵母，被廣泛應(yīng)用在蛋白產(chǎn)品的研究和工業(yè)應(yīng)用上。

在該載體系統(tǒng)中，目的基因通常被克隆在甘油醛-3-磷酸脫氫酶啟動(dòng)子（GAP）和乙醇氧化酶1啟動(dòng)子（AOX1）的下游，這取決于基因的基本結(jié)構(gòu)和表達(dá)誘導(dǎo)條件的要求。GAP是一個(gè)強(qiáng)大的組成型啟動(dòng)子，而AOX1則是受甲醇嚴(yán)格高效調(diào)控的啟動(dòng)子，這兩個(gè)啟動(dòng)子都能夠介導(dǎo)目的基因的高水平表達(dá)，目的蛋白的累加總量往往可達(dá)總細(xì)胞可溶性蛋白的30%以上。一般來說，GAP啟動(dòng)子的表達(dá)能力略強(qiáng)于誘導(dǎo)狀態(tài)下的AOX1啟動(dòng)子。我們建議您做一個(gè)時(shí)間曲線測試，以確定表達(dá)目的蛋白的最佳啟動(dòng)子類型。

與釀酒酵母不同的是，畢赤酵母以甲醇為基礎(chǔ)碳源，能更高水平地介導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)（通常是釀酒酵母的的10-100倍）。另外，畢赤酵母和釀酒酵母在技術(shù)上有許多共通之處（如互補(bǔ)作用），通用的基因注釋和遺傳命名法簡化了兩個(gè)物種的研究。

關(guān)于該載體系統(tǒng)的更多信息，請參考以下文獻(xiàn)。

參考文獻(xiàn)	主題
Gene. 186:37 (1997)	Description of GAP promoter
Mol Cell Biol. 5:1111 (1985) Yeast. 5:167 (1989)	Description of AOX1 promoter

亮點(diǎn)

該載體系統(tǒng)用于在畢赤酵母中組成型或誘導(dǎo)型表達(dá)重組蛋白，目的基因被克隆在組成型啟動(dòng)子GAP或甲醇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子AOX1的下游。

優(yōu)勢

高表達(dá)：GAP和AOX1都能介導(dǎo)目的基因的高水平表達(dá)。

嚴(yán)格控制表達(dá)：在無甲醇的情況下，AOX1啟動(dòng)子無法介導(dǎo)目的基因的表達(dá)；有甲醇的存在下，目的基因被強(qiáng)烈激活表達(dá)。

不足之處

潛在的泄漏表達(dá)：GAP是組成型啟動(dòng)子，表達(dá)水平不會(huì)受到調(diào)控；其次，雖然AOX1啟動(dòng)子在缺乏甲醇的條件下會(huì)被抑制，但少數(shù)情況下目的基因也會(huì)發(fā)生泄漏表達(dá)。

載體關(guān)鍵元件

Promoter: Drives high-level transcription of the gene of interest.

Kozak: Kozak consensus sequence. It is placed in front of the start codon of the ORF of interest because it is believed to facilitate translation initiation in eukaryotes.

ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.

AOX1 TT: The transcription terminator from P. pastoris alcohol oxidase 1. This facilitates transcriptional termination and polyadenylation of mRNA in yeast.

Zeocin: Zeocin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by Zeocin selection in E. coli and yeast.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.

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